血清必須熱滅活嗎、對(duì)此BUNSEN帶您了解相關(guān)疑問(wèn)！

　　血清熱滅活是許多細(xì)胞培養(yǎng)者探討的話題，許多科研的小伙伴拿到一瓶全新的血清，總會(huì)猶豫血清究竟要不要進(jìn)行滅活處理、血清滅活要怎樣操作、在什么情況下要對(duì)血清進(jìn)行滅活等等，關(guān)于這些疑問(wèn)，BUNSEN本生技術(shù)小編今天就為大家做一個(gè)詳細(xì)的解答。

　　一、什么是熱滅活?

　　一般情況下，血清的熱滅活是在血清全部解凍后，置于56℃水浴中30分鐘進(jìn)行處理。如果為了更好的保留血清的營(yíng)養(yǎng)成分，減少熱滅活對(duì)血清的損傷，可以將血清置于40℃水浴中20分鐘進(jìn)行熱滅活。

　　二、血清為什么要熱滅活?

　　很多人認(rèn)為，血清熱滅活是為了消滅血清中的細(xì)菌、病毒等微生物，其實(shí)不然，一瓶合格的血清，在生產(chǎn)過(guò)程中，會(huì)嚴(yán)格把控血清中微生物的指標(biāo)。一般情況下，用戶買到的血清，都是無(wú)菌的，可以在解凍后直接進(jìn)行使用。

　　對(duì)血清進(jìn)行熱滅活處理，實(shí)際是為了使血清中的補(bǔ)體失活。補(bǔ)體是一種血清蛋白質(zhì)，存在于人和脊椎動(dòng)物血清及組織液中，不耐熱，活化后具有酶活性、可介導(dǎo)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。可被抗原-抗體復(fù)合物或微生物所激活，導(dǎo)致病原微生物裂解或被吞噬。

　　三、胎牛血清需要滅活嗎?

　　胎牛血清是來(lái)自未分娩的胎牛，經(jīng)心臟穿刺采血，后經(jīng)其他步驟制備而來(lái)的。這個(gè)階段的血清中，未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng)，不會(huì)真正的干預(yù)免疫。胎牛血清中含有諸如生長(zhǎng)因子、維生素、氨基酸等珍貴物質(zhì)，將血清置于56℃水浴30分鐘，會(huì)導(dǎo)致這些珍貴的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)流失，對(duì)血清造成不小的傷害，所以一般情況下，胎牛血清不需要熱滅活處理。

　　四、什么情況下需要熱滅活處理血清?

　　當(dāng)實(shí)驗(yàn)涉及以下情況時(shí)，建議去除血清可能帶來(lái)的補(bǔ)體系統(tǒng)的干擾：

　　1、誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化

　　2、免疫學(xué)研究

　　3、培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞

　　4、其他補(bǔ)體參與的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程

　　5、利用昆蟲(chóng)細(xì)胞研究病毒感染

　　因此，當(dāng)涉及到一些對(duì)補(bǔ)體比較敏感的實(shí)驗(yàn)，并且血清中補(bǔ)體濃度相對(duì)比較高，可能存在對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響時(shí)，需要考慮對(duì)血清進(jìn)行熱滅活。

　　五、血清熱滅活為什么會(huì)產(chǎn)生大量沉淀?

　　1、血清滅活后出現(xiàn)的沉淀大多數(shù)是纖維蛋白析出，屬正常現(xiàn)象。滅活過(guò)程中，多次搖晃血清，使血清受熱均勻可以降低蛋白的析出。

　　2、當(dāng)血清在未解凍狀態(tài)時(shí)，直接置于56℃水浴，滅活過(guò)程中血清局部受熱溫度過(guò)高，加熱時(shí)間過(guò)長(zhǎng)就會(huì)產(chǎn)生膠狀沉淀，這樣的血清質(zhì)量嚴(yán)重受損，是無(wú)法繼續(xù)正常使用的。

　　總之，多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場(chǎng)合下，熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的生長(zhǎng)，卻降低了支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下，其促進(jìn)的比率也是微不足道的。另外，血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染，從而給用戶和供應(yīng)商都帶來(lái)不必要的麻煩。我們建議，對(duì)于那些對(duì)血清進(jìn)行滅活的用戶，需要通過(guò)試驗(yàn)來(lái)證實(shí)其必要性，確定滅活的適當(dāng)條件;在滅活過(guò)程中，需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測(cè)，并選擇一個(gè)可重復(fù)的方案進(jìn)行操作。

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